台盼蓝

台盼蓝是一种阴离子型染料。台盼蓝不能透过活细胞正常的细胞膜，故活细胞不着色；而死细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色，是最常用的检测细胞活率的方法。该方法不能区分坏死细胞和凋亡细胞。
细胞丧失活性或细胞膜不完整时，台盼蓝可将其染成蓝色，正常的活细胞细胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，细胞不会被染成蓝色。但巨噬细胞能够吞噬台盼蓝，所以可用于巨噬细胞的活体染色剂。

基本性质

1. 化学特性  

   - 分子式：C₃₄H₂₄N₆O₁₄S₄Na₄，分子量：960.82，CAS号：72-57-1。  

   - 外观：蓝灰色至黑褐色结晶粉末，易溶于水（溶解度为10 mg/mL），水溶液呈蓝色。  

   - 分类：亲水性酸性偶氮染料，属细胞活性染料，常用于检测细胞膜完整性。  

2. 储存与稳定性  

   - 粉末：室温干燥避光保存（有效期≥5年）。  

   - 溶液：4%母液需4℃保存，工作液现配现用；部分厂商建议-20℃避光保存（有效期半年）。  

作用机制

台盼蓝通过细胞膜通透性差异区分活细胞与死细胞：  

- 活细胞：膜结构完整，排斥染料，呈无色透明状。  

- 死细胞：膜破损后通透性增加，染料嵌入胞内核酸，染成淡蓝色。  

- 特殊注意：凋亡小体因膜完整性未被破坏，仍表现拒染现象。  

表：台盼蓝染色原理对比  

| 细胞状态 | 膜完整性 | 染色结果      | 判断依据       |  

|--------------|--------------|-------------------|--------------------|  

| 活细胞   | 完整         | 无色透明          | 拒染性             |  

| 死细胞   | 破损         | 淡蓝色            | 染料渗入           |  

| 凋亡小体 | 完整         | 无色透明（假阴性）| 膜未完全破裂       | 

实验操作指南

1. 溶液配制  

- 母液（4%）：4g台盼蓝粉末 + 少量蒸馏水研磨 → 加双蒸水至100mL → 滤纸过滤 → 4℃保存。  

- 工作液（0.04%）：PBS稀释4%母液至0.4%，再按 细胞悬液:染液 = 9:1 混合（终浓度0.04%）。  

2. 染色步骤  

A[制备单细胞悬液] --> B[细胞悬液与0.4%染液9:1混合]

B --> C[室温避光孵育3–5分钟]

C --> D[显微镜下计数]

D --> E[计算存活率：活细胞率 = 活细胞数 / 总细胞数 ×100%]

```

- 关键细节：  

  - 需去除血清残留（用无血清缓冲液清洗），避免背景干扰。  

  - 计数需在3分钟内完成，防止染料毒性导致假死细胞增加。  

注意事项与局限性

1. 毒性风险  

   - 致癌性：属2B类潜在致癌物（WHO IARC），操作需戴手套、口罩及实验服。  

   - 细胞毒性：长时间染色会损伤细胞，导致存活率低估。  

2. 实验干扰因素  

   - 碎片干扰：细胞碎片易误判为死细胞，影响准确性。  

   - 凋亡小体拒染：早期凋亡细胞可能未被染色，造成假阴性。  

3. 替代方案  

   - 荧光染料：如碘化丙啶（PI）+ Calcein-AM双染，适用于流式细胞术。  

产品仅供研究使用，不适用于人或动物的体外诊断与治疗。

由于实验受多种因素影响具有不确定性，以上说明仅供参考，最终解释权归本公司所有。

 核心应用场景

1. 细胞活力检测  

   - 常规培养：快速评估细胞存活率（染色仅需3–5分钟）。  

   - 原代细胞分离：鉴定组织解离后细胞的活性，优化培养条件。  

2. 巨噬细胞活体染色  

   - 可被巨噬细胞吞噬，用于体内外巨噬细胞标记研究。  

3. 其他特殊用途  

   - 胶原/淀粉样蛋白染色：与蛋白结合后发红色荧光。  

   - 荧光淬灭：淬灭细胞表面自发荧光，提升多色实验信噪比。