G-418 遗传霉素硫酸盐 1g

G418是一种氨基糖苷类抗生素，广泛应用于分子生物学和细胞生物学实验中，尤其在稳定转染细胞的抗性筛选中扮演核心角色。以下是详细介绍：

1. 化学特性  

   - 分子式：C₂₀H₄₀N₄O₁₀·2H₂SO₄，分子量692.71，白色粉末，溶于水或甲醇。  

2. 作用原理  

   G418通过结合原核（70S）和真核（80S）细胞的核糖体，干扰肽链延伸，阻断蛋白质合成，从而对细菌、酵母、植物、哺乳动物细胞等产生毒性。  

   - 抗性机制：转染细胞若整合新霉素抗性基因（如`neo`），可表达氨基糖苷磷酸转移酶（APH），该酶修饰G418使其失活，赋予细胞在含G418培养基中生长的能力。

储存条件

2-8℃，有效期4年

实验操作指南

1. 浓度优化（杀灭曲线建立）  

   不同细胞对G418敏感性差异显著（100–1000 μg/mL），需预先实验确定最佳筛选浓度：  

   - 步骤：  

     1. 将未转染细胞稀释至1000个/mL，铺板；  

     2. 设置梯度浓度（如0~1100 μg/mL）；  

     3. 培养10–14天，选择100%杀死细胞的最低浓度作为筛选浓度。  

   - 典型参考浓度：  

     | 细胞类型       | 筛选浓度 (μg/mL) | 维持浓度 (μg/mL) |  

     |---------------------|----------------------|----------------------|  

     | 哺乳动物（如CHO细胞） | 400–1000            | 200                  |  

     | 植物细胞            | 25–50               | 10                   |  

     | 酵母               | 500                 | 125–200              |  

     | 细菌               | 16                  | —                    |  

     数据来源：

2. 筛选流程关键点  

   - 加药时机：转染后24–48小时加入G418，避免过早（基因未表达）或过晚（未转染细胞过度增殖）。  

   - 培养基更换：每3–5天更新含G418的培养基，避免活性下降；后期可降至筛选浓度的一半（维持阶段）。  

   - 支持阳性克隆生长：  

     大量细胞死亡时（约第6天），使用条件培养基（50%新鲜培养基 + 50%高汇合度同种细胞培养上清）提供生长因子，改善存活克隆状态。

3. 单克隆分离与验证  

   - 方法：有限稀释法、套环法或刮除法分离抗性克隆。  

   - 稳定性验证：筛选后需传代≥10次，并二次加压筛选，排除未整合外源基因的细胞。

注意事项与常见问题

1. 关键操作规范  

   - 避免合用其他抗生素：青霉素/链霉素等可能竞争性抑制G418，干扰筛选效果。  

   - 配制校准：根据产品批次效价换算实际称量值（公式：`(1000/A₀) × A₁ = A₂`，A₀=效价，A₁=目标活性浓度）。  

   - 储存条件：干粉室温避光保存，溶液需-20℃储存，避免反复冻融。  

2. 常见问题解决  

   - 细胞死亡延迟：G418需2–3天才显效，快速增殖细胞更易被杀死。  

   - 克隆形态异常：外源基因整合可能改变细胞生理状态，需WB/PCR验证表达稳定性。  

   - 筛选失败：可能因浓度不足、细胞密度过高或抗性基因未有效整合。

产品仅供研究使用，不适用于人或动物的体外诊断与治疗。

由于实验受多种因素影响具有不确定性，以上说明仅供参考，最终解释权归本公司所有。

应用领域

1. 稳定转染细胞株筛选  

   - 用于筛选携带`neo`抗性基因的细胞，如哺乳动物、植物或酵母细胞的转基因实验。  

   - 常见场景包括基因过表达、基因敲除（如CRISPR-Cas9系统）及转基因动物模型构建。  

2. 抗污染特性  

   G418本身具有广谱杀菌效果，可抑制细菌和真菌污染，在筛选过程中减少额外抗生素的使用。